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米乐M6 米乐WB 如何一分钟蛋白定量？师姐秘籍

发布时间：2023-06-12 10:34:57 丨 浏览次数：656

　　WB 实验的蛋白定量耗费时间有点长，整个过程耗时接近 2 小时。但不做又会影响内参条带与数据的稳定性。

　　常规的蛋白定量至少有 5 种方法：BCA，Bradford，双缩脲法（Biuret 法），Folin 法（Lowry 法）和紫外分光光度计法。

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　　原理是在碱性条件下，氨基酸将二价铜还原为一价铜与 BCA 形成紫颜色的络合物，测定 562 nm 的 OD 值，所以如果样本里有还原剂（比如 DTT）的话就会对 BCA 的结果产生干扰。

　　是在酸性条件下，加入考马斯亮蓝 G250 与蛋白质（主要是碱性或芳香族氨基酸）结合为蓝色化合物，吸光度值从 465nm 变成 595 nm，最后测定 595 nm 的 OD 值来计算蛋白质浓度。

　　是利用氨基酸在 280 nm 处有吸收峰来定量，由于不同氨基酸吸收峰值略有不同，故在蛋白质成分单一的情况下使用佳，比如蛋白纯化后估测蛋白的浓度。

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